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Shimadzu 사의 HPLC

HPLC의 원리 및 구성
  • 화합물은 구조에 따라 이동상(용매)과 고정상(column충전제)과의 화학적 결합에 차이가 있으며 흡착, 분배, 이온교환, 크기배제 등에 따라 분리되는 정도가 다르므로 이러한 성질을 이용하여 혼합물 중의 단일성분을 분리, 정제 및 정성, 정량분석이 가능한데, 액체를 이동상으로 사용하는 경우를 액체 크로마토그래피라 함. 액체 크로마토그래피는 화합물의 분자량에 제한이 없으며 시료의 안정성에도 덜 민감하고, 또한 시료회수가 용이함. 이러한 액체 크로마토그래피의 분리 효율을 더욱 높이기 위해 고안된 장치가 high performance liquid chromatography (HPLC)임. 즉, HPLC system은 고정상(column내 충진제)의 입자의 크기를 10 ㎛ 이하의 것을 사용하므로 이동상(solvent)가 흐를 수 있도록 수십기압의 압력을 가하여 물질의 분리할 수 있게 해주는 장치
  • HPLC system은 이동상(solvent) 저장용기와 기체제거장치(degasser), 펌프(pump), 고정상(column), 시료주입장치(injector), 검출기(detector), 기록기(recorder)의 기본 장치들로 구성
Injection Part
  • 분석하고자 하는 시료를 용매의 흐름에 실어줌
High pressure Pump
  • 이동상을 이동상 저장용기에서 끌어들여 시료 주입기로 연속적으로 밀어냄
Column
  • 혼합 상태의 시료를 화학적/물리적 특성에 따른 머무름 정도의 차이에 의해 분리. 본 실험실에서는Strong Cation Exchange (SCX) column , C8 column, Multiple Affinity Removal System (MARs) column 등을 보유하여 대부분 peptide or protein을 fractionation 하는데 사용함
Detector
  • Column에서 분리된 시료가 일정한 간격으로 검출기를 통과할 때 시료의 존재 및 양을 일정한 규칙에 의해 인식하도록 전기적인 신호로 바꿔줌
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